南京普怡植物黃酮的分離純化

黃酮類化合物的提取

化合物：極性---溶劑萃取酸性---堿提酸沉解離性—離子交換

（1）溶劑萃取法關(guān)鍵：溶劑的選擇溶劑選擇依據(jù)：黃酮類成分的存在狀態(tài)（游離、苷）及溶解度提取方法選擇依據(jù)：溶劑的溶解性能

或CaO (2)堿提酸沉淀法酚羥基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出。堿：常用Ca(OH2)水溶液。優(yōu)點(diǎn)：含酚羥基化合物成鹽溶解，且可使含COOH的果膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)形成沉淀而除去。注意：堿性不宜過(guò)強(qiáng)，以免破壞黃酮母核；酸性(pH3-4)

不宜過(guò)強(qiáng)，以免形成鹽而溶解。

(3)炭粉吸附法：苷類的精制

（4）離子交換法原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；用陰離子交換樹脂交換，加酸后析出，用有機(jī)溶劑洗脫。

優(yōu)點(diǎn)：可除去黃酮類化合物中的水溶性雜質(zhì)?？删泣S酮類化合物與金屬離子形成的鹽類或絡(luò)合物。

（5）大孔吸附樹脂法

2.黃酮類化合物的分離

極性大小不同和吸附性差別，利用吸附（各種吸附柱）或分配原理進(jìn)行分離。酸性強(qiáng)弱不同，利用梯度pH萃取法進(jìn)行分離;分子大小不同，利用葡聚糖凝膠分子篩分離.分子中某些基團(tuán)的特殊性質(zhì)，利用金屬鹽絡(luò)合能力不同進(jìn)行分離。常用分離方法：硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠柱層析、梯度pH萃取等。

柱層析法(較常用的分離方法)常用吸附劑或載體：硅膠、聚酰胺及纖維素粉等。

此外，也有氧化鋁、氧化鎂及硅藻土等。

（1）硅膠柱層析

（2）氧化鋁柱層析(少)不適合分離具有3-OH或5-OH、4-羰基及鄰二酚羥基黃酮類化合物。

   (3) 聚酰胺柱層析原理：酰胺羰基可與酚羥基形成氫鍵，可用于分離各種類型的黃酮類化合物；形成氫鍵主要指酚羥基，糖部分不參與形成氫鍵。

(3)聚酰胺色譜(氫鍵吸附) 酚羥基數(shù)目越多，吸附能力越強(qiáng)。酚羥基數(shù)目相同的情況下，酚羥基所處的位置有利于形成分子內(nèi)氫鍵,吸附能力減弱。3-OH或5-OH黃酮的吸附力小于其他位置-OH黃酮;鄰二酚羥基黃酮的吸附力弱于間位或?qū)ξ环恿u基黃酮分子內(nèi)芳香化程度越高，共軛雙鍵越多，吸附力越強(qiáng)。查耳酮>二氫黃酮不同類性的黃酮類化合物，吸附力大?。狐S酮醇>黃酮>查耳酮>二氫黃酮(醇)>異黃酮

洗脫規(guī)律:吸附能力越強(qiáng)，越難洗脫。苷元相同,洗脫先后順序一般是:三糖苷>雙糖苷>單糖苷>苷元母核上增加羥基，洗脫速度減緩。

不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮>二氫黃酮醇>黃酮>黃酮醇

（4）葡聚糖凝膠柱層析雙重色譜原理

分子篩作用（按分子大小分離）黃酮苷的分離洗脫順序：分子由大到小三糖苷>雙糖苷>苷元吸附原理（按極性大小分離）游離黃酮的分離極性由小到大1-OH>2-OH>3-OH>4-OHOH)鹽水溶液(0.5mol/L NaCl 常用的洗脫劑有：水溶液：堿性水溶液（0.1mol/L NH4等)。

②醇及含水醇：如甲醇、甲醇-水（不同比例）丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等。其它溶劑：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。

(5)液滴逆流層析利用混合物中各組分在兩液相中分配系數(shù)的差異，移動(dòng)相形成液滴通過(guò)固定相的液柱實(shí)現(xiàn)混合物的分離。不需要固體擔(dān)體，避免不可逆吸附造成的損失;常用的溶劑：氯仿-甲醇-水、氯仿-甲醇-丙酮-水

(6) 高效液相色譜法（HPLC）應(yīng)用：適用于各種黃酮類化合物的分離原理：反相柱色譜 流動(dòng)相：水-乙腈、水與甲醇不同比例2）pH梯度萃取法依據(jù)：游離黃酮苷元酸性的差異

3）根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離鉛鹽法分離鄰二酚羥基（或兼有3-OH、4-羰基或5-OH、4-羰基）黃酮 + 醋酸鉛----沉淀一般酚類黃酮 + 堿性醋酸鉛----沉淀S進(jìn)行復(fù)分解；硫酸鹽或磷酸鹽或陽(yáng)離子交換樹脂。脫鉛處理：通入H2硼酸沉淀法鄰二酚羥基黃酮 + 硼酸---絡(luò)合物溶于水